葛根及其制剂中异黄酮类成分测定方法的研究进展

葛根为豆科植物野葛(pueraria、Lobatawilldohwi)或甘葛藤(puerariathomsoniiBenth)的干燥根。近年来，经过葛根化学成分、临床药理的科学研究表明：葛根的主要有效成分为异黄酮化合物［1，2］，其中葛根素的含量最高，因此测定葛根中异黄酮类成分(主要是葛根素)的含量，成为评价葛根药材及其制剂质量的重要指标，本文概述了近10年来的研究进展。

1　分光亮度法

1.1　紫外分光亮度法

主要利用葛根素分子结构中羟基和芳环形成较强的共轭体系，对紫外光(250±1nm)有较强的特征吸收，且性质稳定。

刘直［3］采用大豆素代替葛根素作为对照品，在250nm波长处测定愈风宁心片中总异黄酮的含量，并与以葛根素为对照品的测定方法作了比较，结果表明：大豆素标准品可以代替葛根素标准品用于总异黄酮的测定。

梁文法等［4，5］以氯仿-无水乙醇(7∶3)为展开剂，在硅胶G-CMC-Na薄层板上分离葛根素，以乙醇洗脱，在251nm波长处测定葛根及愈风宁心片中葛根素的含量。

周小初等［6］以氯仿-甲醇-水(7∶2.5：0.25)为展开剂，测定了冠心灵片中葛根素的含量，并对葛根药材中葛根素含量进行比较，结果表明野葛根与粉葛根中葛根素含量相差10～67倍。

王名洲等［7］选用正丁醇处理样品，采用薄层-紫外法对心通口服液中葛根素的含量进行测定，该方法简便、稳定、结果准确。标准曲线相关系数r=0.9996，平均回收率为99.57%，RSD为0.60%。

葛新等［8］采用薄层层析一阶导数光谱法对益心脑胶囊中葛根素含量进行测定，加样回收率为96.43%，RSD为1.25%。1.2　薄层层析-比色法　用薄层层析分离葛根素，利用葛根素分子结构中的酚羟基，能与磷钨酸-磷钼酸试剂产生颜色反应，在700nm波长处有最大吸收的特性进行比色测定。

詹贵成等［9］利用硅胶G薄层板，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯-水(27∶28∶40∶10)展开，葛根素为对照品，在700nm波长处测定了葛根芩连汤中葛根素的含量。

徐礼等［10］以氯仿-甲醇(8∶2)为展开剂，测定了葛根药材中葛根素的含量。

2　色谱法

2.1　薄层扫描法(TLCS)

多用于测定葛根及其制剂中葛根素的含量。具有取样量少，操作简便，分离效果好，结果准确的特点。

赵胜利等［11］以展开剂Ⅰ：氯仿-甲醇-水(60∶40∶9)分离葛根素，以展开剂Ⅱ：氯仿-甲醇-醋酸乙酯-水(2∶2∶4∶1)分离黄豆甙元，用盐酸羟铵-硝酸铈铵为显色剂，选用440nm滤光片，扫描测定了愈风宁心片中两种成分的含量。

赵世萍等［12］以甲苯-甲醇-10%甲酸(7∶3∶0.2)和醋酸乙酯-甲醇-50%甲酸(8∶2∶0.2)为展开剂，在硅胶G薄层板上分离了大豆甙元、大豆甙、葛根素和大豆甙元-4’，7-二葡萄糖，采用双波长反射锯齿扫描法，在λs=250nm，λR=360nm，测定了葛根及愈风宁心片中四种成分含量。

闵庆旺等［13］，选用硅胶GF254预制薄层板，醋酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)为展开剂，芦丁为内标物进行单波长反射法锯齿扫描λs=275nm，测定愈风宁心片中葛根素的含量，线性范围为0.38～3.8μg。

傅先珏等［14］采用中性氧化铝柱处理样品以硅胶GF254薄层板为固定相，氯仿-甲醇-水(60∶40∶9)为展开剂，在饱和氨蒸气下展开，进行双波长反射法锯齿扫描λs=260nm、λR=360nm测定复方伤风胶囊中葛根素的含量。

李守拙等［15］选用硅胶GF254薄层板，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯-冰醋酸(8∶4∶1∶0.5)及氯仿-甲醇(5∶1)两次展开，进行双波长反射法锯齿扫描λs=254nm、λR=333nm，测定了20批颈复康冲剂中葛根素的含量。

秦青［16］以95%乙醇处理样品，氯仿-甲醇-水(25∶16∶3)为展开剂，进行扫描测定λs=258nm，λR=360nm，测定玉泉冲剂中葛根素的含量，线性范围0.24～0.60μg。

郭建平等［17］采用高效硅胶板GF254，氯仿-甲醇-水(7∶2.5∶0.5)为展开剂，在255nm处紫外扫描测定葛根提取物及其制剂中葛根素的含量。

李正国等［18］采用超声振荡处理样品，氯仿-甲醇-醋酸乙酯-水(8.1∶9.4∶26∶4)为展开剂，进行双波长反射法线性扫描λs=305nm，λR=369nm。测定了止痢冲剂中葛根素的含量。

张蕾等［19］采用硅胶G薄层板，氯仿-甲醇-水(60∶40∶6.5)为展开剂，进行双波长反射法锯齿扫描λs=270nm、λR=370nm，对不同品种和产地的葛根中所含葛根素进行测定比较，结果野葛根中所含葛根素较粉葛根高约8～10倍。

苏健等［20］采用硅胶G0.3%CMC-Na薄层板，氯仿-甲醇-水(78∶35∶10)下层液为展开剂，进行单波长反射法锯齿扫描λs=265nm，测定镇脑宁胶囊中葛根素的含量。葛根素浓度在1.054～5.27μg范围内呈线性关系。2.2　高效液相色谱法(HPLC)　多用于葛根及其制剂中葛根素的测定。具有分析精度高，测定结果准确的特点，样品多采用不同浓度的甲醇、乙醇直接提取，也有经柱层析分离等方法。

张伟等［21］采用SpherisorbC18(5.0×200mm)色谱柱，甲醇-水(20∶80)为流动相，柱温40℃，检测波长250nm，以聚酰胺粉净化处理样品，测定鼻炎胶囊中葛根素含量，空白无干扰。

李汶等［22］采用ODS柱(250×4.6mm，5μm)，甲醇-50%醋酸液为流动相，采用梯度淋洗方式于UV280nm波长处测定脑脉康胶囊中葛根素的含量，线性范围为0.156～2.94μg，平均加样回收率99.89%，RSD为0.55%。

张世勤等［23］选用ODSC18(4.6×250mm)色谱柱，流动相甲醇-水(25∶75)，水为50mgEDTA与15.6gNaH2PO3溶至1000mL双蒸馏水的混合液。检测波长305nm，测定根痛平中葛根素的含量。

谭生健等［24］采用ShimpackCLC_ODS(150×6mm)分析柱，ODS保护柱，流动相甲醇-水(23∶77)，柱温35℃，检测波长250nm，外标法计算含量，测定葛根芩连片中葛根素的含量。李光慧等［25］采用KYWG-C18为固定相，水-甲醇-N，N-二甲基甲酰胺(40∶10∶3)为流动相，UV检测波长250nm,对御感袋泡茶中葛根素进行含量测定。

李冠忠等［26］采用YWG10μm,C18(250×4.6mm)色谱柱，甲醇-水(25∶75)为流动相，检测波长250nm，外标法，测定心通口服液中葛根素含量，平均回收率为98.67%，RSD为1.23%。

仲英等［27］选用ResolveC18(8×100mm)径向加压色谱柱，以甲醇-水为流动相，梯度洗脱，检测波长250nm，外标法，分别测定了2～12月份采集的葛根中葛根素的含量与其质量变化。结果葛根在不同季节葛根素的含量差异较大，6月份含量最高，约为3.5%，质量变化不大。

张小茜等［28，29］采用C18(4.6×250mm)色谱柱，甲醇-水(25∶75)为流动相，检测波长250nm，以30%乙醇为溶剂超声振荡处理样品，分别测定葛根及愈风宁心片中葛根素的含量。

章育中等［30］选用ZorbaxODS(4.0×250mm)层析柱，甲醇-水(32∶68)为流动相，流速0.4～1.4mL/min，橙皮甙为内标物，测定不同产地葛根及愈风宁心片中大豆甙元-4’，7-二葡萄糖甙、葛根素、4’-甲氧基葛根素、大豆甙、大豆甙元五种异黄酮的含量。

冯瑞芝等［31］采用ZY110　YWQ-C18(10μm，4.0×250mm)色谱柱，流动相(1)MeOH-H2O-CH2Cl2-1.7×10-3mol/L　NH4Ac(100∶275∶2∶50)；(2)MeOH-H2O-1.7×10-3mol/LNH4Ac(175：175∶50)用于分离黄豆甙元，检测波长250nm对6种葛属植物根中五种异黄酮的含量进行了测定，结果野葛质量最佳，其次是粉葛。