《实用免疫细胞与核酸》 （二）蛋白A-金（PAG）放大法

为了得到更明确的染色结果，在用IGS方法定位细胞抗原时可采用搭桥法，使IGS得到放大，这里介绍一种用抗A蛋白抗体作桥的PAG放大法。下面以5-羟色胺定位为例说明这一新方法。

（1）石蜡切片→脱蜡至水。

（2）1%胰蛋白酶消化10min或3mon/L尿素消化30min。

（3）0.05mol/l pH7.4 TBS振洗5＇×2。

（4）1%EA封闭组织10min。

（5）用0.05mol/l pH7.4 TBS 稀释兔抗5-羟色胺抗体（1：1000）4℃过夜，或者37℃1h。

（6）0.05mol/l pH7.4 TBS振洗5＇×2。

（7）1%EA封闭10min。

（8）用0.05mol/l pH7.4 TBS 稀释PAG（1：40），37℃1h。

（9）0.05mol/l pH7.4 TBS振洗10＇×2。

（10）1%EA封闭10min。

（11）抗A蛋白抗体（1：100）37℃。45min。

（12）0.05mol/l pH7.4 TBS振洗10＇×2。

（13）加0.05mol/l pH7.4 TBS稀释PAG（1：40），37℃45min。

（14）0.05mol/l pH7.4 TBS振洗10＇×2。

（15）双蒸水振洗5min。

（16）1%戊二醛10min。

（17）双蒸水振洗5min。

（18）0.01%伊文思蓝2min，甘油封片。

光镜下观察，小肠粘膜内含有嗜银颗粒的细胞胞浆呈红色，阳性颗粒位于细胞核底部，比单纯用PAG染色深度得到加深，阳性结果得到放大。由于抗A蛋白抗体既能通过Fab段又能够通过Fc段与PAG上的A蛋白结合，因此，与其它桥抗体相比它能够在抗原位点处聚集更多的胶体金颗粒。基本原理如下图5-3。

图5-3 PAG放大法原理

PAG放大法的优点：①使用试剂单一；②可大大提高IGS的敏感性，从而使应用IGS方法定位抗原时使用高稀释度的抗体成为可能；③背景干净。可以预见这一新方法将很快受到人们的关注。